聚丙烯酰胺陽離子【聚丙烯酰胺凝膠電泳dna】聚丙烯酰胺凝膠電泳電壓
聚丙烯酰胺陽離子【聚丙烯酰胺凝膠電泳dna】聚丙烯酰胺凝膠電泳電壓
產(chǎn)品價格:¥13000(人民幣)
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    商品詳情
      聚丙烯酰胺陽離子【聚丙烯酰胺凝膠電泳dna】聚丙烯酰胺凝膠電泳電壓

      尊敬的新老用戶,歡迎光臨我們的網(wǎng)站,這里是河南神泰環(huán)保科技有限公司,我公司地處中原腹地,有著豐富的原材料資源,十余年的凈水行業(yè)經(jīng)驗,舉國一流的產(chǎn)品加工工藝、科學合理的產(chǎn)品價格。我們有熱情的在線客服為您服務(wù),如果您有什么需要,隨時可以和我們聯(lián)系。QQ咨詢:690649456。 下面是我們的產(chǎn)品介紹,您可以詳細了解:


        一、原理
            
        細菌體中含有大量蛋白質(zhì),具有不同的電荷和分子量。強陰離子去污劑SDS與某一還原劑并用,通過加熱使蛋白質(zhì)解離,大量的SDS結(jié)合蛋白質(zhì),使其帶相同密度的負電荷,在聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)上,不同蛋白質(zhì)的遷移率僅取決于分子量。采用考馬斯亮蘭快速染色,可及時觀察電泳分離效果。因而根據(jù)預(yù)計表達蛋白的分子量,可篩選陽性表達的重組體。

        、試劑準備

        1、30%儲備膠溶液:丙烯酰胺(Acr)29.0g,亞甲雙丙烯酰胺(Bis)1.0g,混勻后加ddH2O,37OC溶解,定容至100ml, 棕色瓶存于室溫。
        2、1.5M Tris-HCl(pH 8.0):Tris 18.17g加ddH2O溶解, 濃鹽酸調(diào)pH至8.0,定容至100ml。
        3、1M Tris-HCl(pH 6.8):Tris 12.11 g加ddH2O溶解, 濃鹽酸調(diào)pH至6.8,定容至100ml。
        4、10% SDS:電泳級SDS 10.0 g加ddH2O 68℃助溶,濃鹽酸調(diào)至pH 7.2,定容至100ml。
        5、10
        ´電泳緩沖液(pH 8.3):Tris 3.02 g,甘氨酸 18.8 g,10% SDS 10ml加ddH2O溶解, 定容至100ml。
        6、10%過硫酸銨(AP): 1gAP加ddH2O至10ml。
        7、
        2´SDS電泳上樣緩沖液:1M Tris-HCl (pH 6.8)2.5ml,b-巰基乙醇1.0ml,SDS 0.6 g,甘油 2.0ml,0.1%溴酚蘭 1.0ml,ddH2O 3.5ml。
        8、
        考馬斯亮蘭染色液:考馬斯亮蘭  0.25 g,甲醇225ml,冰醋酸 46ml,ddH2O 225ml。
        9、
        脫色液:甲醇、冰醋酸、ddH2O以3∶1∶6配制而成。
        二、
        操作步驟
        采用垂直式電泳槽裝置

        (一)聚丙烯酰胺凝膠的配制

        1、  
        分離膠(10%)的配制:
           ddH2O                 4.0ml

           30%儲備膠             3.3ml
           1.5M Tris-HCl          2.5ml
           10% SDS               0.1ml
           10% AP                0.1ml
          
        取1ml上述混合液,加TEMED(N,N,N
        ,N-四甲基乙二胺)10μl封底,余加TEMED 4μl ,混勻后灌入玻璃板間,以水封頂,注意使液面平。(凝膠完全聚合需30-60min)
        2、  
        積層膠(4%)的配制:
         
        ddH2O                  1.4 ml
         
        30%儲備膠             0.33 ml
         
        1M Tris-HCl           0.25 ml
         
        10%SDS                0.02 ml

         
        10%AP                 0.02 ml
         
        TEMED                   2 μl

         
        將分離膠上的水倒去,加入上述混合液,立即將梳子插入玻璃板間,完全聚合需15-30min。

        (二)樣品處理:將樣品加入等量的2
        ×SDS上樣緩沖液,100℃加熱3-5min,離心12000g×1min,取上清作SDS-PAGE分析,同時將SDS低分子量蛋白標準品作平行處理。

        (三)上樣: 取10μl誘導(dǎo)與未誘導(dǎo)的處理后的樣品加入樣品池中,并加入20μl低分子量蛋白標準品作對照。

        (三) 
        電泳:在電泳槽中加入1´電泳緩沖液,連接電源,負極在上,正極在下,電泳時,積層膠電壓60V,分離膠電壓100V,電泳至溴酚蘭行至電泳槽下端停止(約需3hr)。
        (四) 
        染色:將膠從玻璃板中取出,考馬斯亮蘭染色液染色,室溫4-6hr。
        (五) 
        脫色:將膠從染色液中取出,放入脫色液中,多次脫色至蛋白帶清晰。
        (六) 
        凝膠攝像和保存:在圖像處理系統(tǒng)下將脫色好的凝膠攝像,結(jié)果存于軟盤中,凝膠可保存于雙蒸水中或7%乙酸溶液中。
        三、
        注意事項

        1、
        實驗組與對照組所加總蛋白含量要相等。
        2、
        為達到較好的凝膠聚合效果,緩沖液的pH值要準確,10%AP在一周內(nèi)使用。室溫較低時,TEMED的量可加倍。
        3、
        未聚合的丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性,可通過皮膚和呼吸道吸收,應(yīng)注意防護。

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