聚丙烯酰胺干燥 蛋白質(zhì)聚丙烯酰胺凝膠電泳 聚丙烯酰胺項目
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產(chǎn)品價格:¥13000(人民幣)
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    商品詳情
      聚丙烯酰胺干燥 蛋白質(zhì)聚丙烯酰胺凝膠電泳 聚丙烯酰胺項目

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      一.試劑制備:
      1.分離膠緩沖液(pH8.9):36.6gTris,48ml1mol/l的HCl,或先加水至80ml,用濃HCl調(diào)pH,再定容至100ml.
      2.濃縮膠緩沖液(pH6.7):5.98gTris,48ml1mol/l的HCl, 或先加水至80ml,用濃HCl調(diào)pH,再定容至100ml.
      3.30%丙烯酰胺(pH≤7.0):29g丙烯酰胺和1g甲叉雙丙烯酰胺,溶于60ml水中,加熱至37ºC溶解,補(bǔ)水至100ml,用棕色瓶貯存于室溫,幾個月后重新配置。
      4.10%過硫酸銨(W/V):1g溶于10ml水中,4ºC保存數(shù)周,盡量現(xiàn)用現(xiàn)配。
      5.四甲基乙二胺(TEMED)
      6.10%SDS。將10gSDS溶于80ml重蒸水中并輕緩攪拌(室溫低時需水浴加熱溶解),再定容至100ml,室溫存放。
      7.樣品緩沖液:5ml1mol/l的Tris-HCl(pH6.7),2.5gSDS,1ml巰基乙醇,0.05g溴酚蘭,10g蔗糖,加水定容至100ml。
      8.考馬斯亮藍(lán)染色液:0.25g考馬斯亮藍(lán)R-250用少量甲醇溶解后,用甲醇(40ml)-乙酸(10ml)水溶液稀釋至100ml。
      9.脫色液:90ml甲醇:水(1:1)和10ml冰醋酸配成100ml脫色液
      10.Tris-甘氨酸電泳緩沖液(pH8.3):在900ml去離子水中溶解15.1gTris堿,94g甘氨酸,加入50ml10%(W/V)的電泳級SDS貯液,用去離子水補(bǔ)至1000ml量則成5×貯液。
      二.電泳
      1.用1%瓊脂將長玻璃板下端封住,冷凝30分,灌12%分離膠(4.9ml蒸餾水,6.0ml30%丙烯酰胺,3.8ml1.5mol/lTris-HCl,150μl10%SDS, 150μl 10%過硫酸銨, 6μl TEMED),灌到至短玻璃板4cm,用水封住,冷凝30分后將水倒出,吸干,灌滿5%濃縮膠(5.5ml蒸餾水,1.3ml30%丙烯酰胺,1.0ml1.5mol/lTris-HCl,80μl10%SDS, 80μl 10%過硫酸銨, 8μl TEMED)后立即插入梳子,冷凝30分后取出梳子,將1×電泳緩沖液倒入電泳槽,并淹沒短玻璃板
      2.取30μl蛋白提取液與30μl樣品緩沖液混合,于100℃水浴加熱3min使蛋白變性,用微量進(jìn)樣器以50μl的量注入點樣孔,不加樣槽注入樣品緩沖液。
      3.以濃縮膠中100V,分離膠中180V電壓進(jìn)行電泳,至距底線1cm時關(guān)閉電源
      4.將電泳后的凝膠取出,置于培養(yǎng)皿中,用蒸餾水沖去殘留緩沖液,加入染色液將凝膠完全浸泡其中,放入微波爐內(nèi),高火檔照射20秒,停留1min,再照射10秒,反復(fù)幾次至凝膠上色后倒出染色液,用蒸餾水沖去殘留染色液,加入脫色液,高火檔照射20秒,倒出脫色液,再加入新鮮脫色液照射20秒,重復(fù)5-6次,直至背景清晰透明,于凝膠分析儀上成像分析。
       

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