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Chip原理的詳細資料:
Chip原理實驗操作流程:
1 、Chip原理樣品準備與交聯
細胞收集后,用37%的formaldehyde處理細胞,交聯核酸與DNA結合蛋白;
2. Chip原理超聲打斷染色質
裂解細胞,用Bioruptor將染色質超聲破碎成200-1000bp片斷;將片段分為兩份,一份用于免疫共沉淀,一份用于對照。
3 、Chip原理免疫共沉淀 (IP)
取B步驟所得一份片斷與ChIP特異抗體結合進行免疫共沉淀,利用免疫磁珠法富集抗體復合物。
4 、Chip原理解交聯及純化 DNA
將富集的DNA/蛋白復合物解交聯釋放DNA,并進行純化(IP DNA);B步驟所得用于對照(Input DNA)的片斷作不進行IP實驗,但也要解交聯并純化。
5 、 Chip原理DNA 段 PCR 擴增
針對ChIP DNA, Input DNA及對照DNA的目的片段設計特異性引物并進行熒光定量PCR擴增。
6 、Chip原理結果分析
%Input=2(CtInput-CtChIP)×Fd×100%
Fold Enrichment = [%(ChIP/Input)] / [%( control/Input)]
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